期刊简介
本刊是专业学术性期刊。以交流推广肾脏病学、透析及肾移植方面的科研成果和临床实践经验，推动我国肾脏病学的发展为己任。设有述评、论著、学术快讯、论著摘要、基础医学、医学继续教育、肾脏病基础与临床、血液净化、肾脏移植、肾活检、实验室方法、学术争鸣等栏目。本刊为科技期刊统计源、核心期刊，为各种数据库和检索期刊收为信息源。为业内专业技术人员和大专院校师生重点阅读刊物。
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首页>肾脏病与透析肾移植杂志
- 杂志名称：肾脏病与透析肾移植杂志
- 主管单位：江苏省卫生厅
- 主办单位：金陵医院肾脏病研究所
- 国际刊号：1006-298X
- 国内刊号：32-1425/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：江苏省优秀期刊期刊收录：CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), CA 化学文摘(美), 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
核心蛋白聚糖真核表达载体及逆转录载体的构建及鉴定
王伟铭；陈楠；陈晓农；糜军；陈诗书；董德长
关键词：核心蛋白聚糖, 真核表达载体, 逆转录病毒载体
摘要：目的:通过获取核心蛋白聚糖(decorin,DCN)基因,构建DCN真核表达载体和DCN逆转病毒载体,以探索今后肾脏疾病基因治疗的途径.方法:从大鼠肾脏组织中抽取RNA,经逆转录-PCR方法,扩增核心蛋白聚糖cDNA,并经序列测定正确后,将DCN插入真核表达载体pcDNA3,应用Lipofectamine介导将pcDNA3-DCN转染真核细胞COS-7细胞,并于转染后48、72和96h用ELISA方法测定细胞上清液DCN的表达量;进一步将DCN插入逆转录病毒载体pLXSN,抽提质粒,应用EcoRI和XhoI双酶切,选出阳性克隆,经大量质粒抽提、纯化后进一步鉴定插入DNA片段的正确性.结果:测序载体pBluescriptⅡ与DCN连接后检测DCN序列结果正确,从而获得DCN基因序列;经Lipofectamine介导转染COS-7细胞,于转染后72h细胞上清液DCN的蛋白量明显增加.pLXSN-DCN酶切后,电泳可见1.1kb的条带,提示DCN插入pLXSN成功.结论:本研究所构建的真核表达载体pcDNA3-DCN在体外COS-7细胞可短暂表达DCN,并成功地采用逆转录病毒载体pLXSN(克隆位点在5'-病毒长末端区(5'-LTR)的下游,插入的目的基因受5'-LTR启动子调控),通过EcoRI和XhoI酶切位点插入而获得核心蛋白聚糖逆转录病毒载体pLXSN-DCN.
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