期刊简介
本刊是专业学术性期刊。以交流推广肾脏病学、透析及肾移植方面的科研成果和临床实践经验，推动我国肾脏病学的发展为己任。设有述评、论著、学术快讯、论著摘要、基础医学、医学继续教育、肾脏病基础与临床、血液净化、肾脏移植、肾活检、实验室方法、学术争鸣等栏目。本刊为科技期刊统计源、核心期刊，为各种数据库和检索期刊收为信息源。为业内专业技术人员和大专院校师生重点阅读刊物。
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首页>肾脏病与透析肾移植杂志
- 杂志名称：肾脏病与透析肾移植杂志
- 主管单位：江苏省卫生厅
- 主办单位：金陵医院肾脏病研究所
- 国际刊号：1006-298X
- 国内刊号：32-1425/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：江苏省优秀期刊期刊收录：CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), CA 化学文摘(美), 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中)
血管生成素样蛋白2纤维蛋白原样功能域多克隆抗体制备及分析
郑敬民；刘志红；孙骅；贾忠辉；陈丹；黎磊石
关键词：血管生成素样蛋白2, 多克隆抗体, 糖尿病肾病
摘要：目的:克隆血管生成素样蛋白2(angiopoietin like protein 2,ANGPTL 2)cDNA;构建ANGPTL 2纤维蛋白原样功能域原核表达载体;表达得到ANGPTL 2纤维蛋白原样功能域融合蛋白;制备针对ANGPTL 2纤维蛋白原样功能域的多克隆抗体,为全面分析研究ANGPTL 2的功能及其与糖尿病肾病微血管病变的关系创造条件. 方法:利用RT-PCR方法从肾脏总RNA中扩增ANGPTL 2全长cDNA;以其为模板扩增编码ANGPTL 2纤维蛋白原样功能域的cDNA 片段,并进而将其克隆至原核表达载体pET-15b上, 构建成ANGPTL 2纤维蛋白原样功能域的原核表达载体pET-ANGPTL 2; 将pET-ANGPTL 2导入BL21(DE3)菌内,通过IPTG诱导表达重组蛋白;利用重组蛋白5'端带有His tag的特点,采用含Ni的树脂进行亲和吸附纯化,获取高纯度的重组蛋白;将重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗ANGPTL 2多克隆抗体;利用ELISA法测定和免疫组化分析对此多抗的效价和特异性进行分析. 结果:取得了带有完整阅读框的ANGPTL 2全长cDNA ;构建成与预先设计完全一致的原核表达载体pET-ANGPTL 2;成功地在大肠杆菌中进行了ANGPTL 2纤维蛋白原样功能域融合蛋白的表达,纯化获取纯度很高的重组蛋白;经免疫兔获取高效价的针对ANGPTL 2纤维蛋白原样功能域的多克隆抗体;ELISA检测和免疫组化分析表明,此抗体不仅具有很高的效价,而且具有很好的特异性. 结论:我们成功地克隆了ANGPTL 2 cDNA ,构建了其原核表达载体,进行了原核表达,成功取得高纯度的重组蛋白,并得到了高效价、高特异性针对ANGPTL 2纤维蛋白原样功能域的多克隆抗体,为全面分析研究ANGPTL 2功能及其与糖尿病肾病微血管病变的关系创造条件.
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